本来想从头到尾按照实验顺序写一个总结，结果今天正好做实验的时候SDS-PAGE的loading_buffer没了，临时改造了琼脂糖凝胶的loading_buffer，就顺便先从loading_buffer开始写了。这个东西也是大多数人容易忽略的细节。

loading_buffer的作用是让蛋白样品变成可以用于电泳的状态，主要功能包括：

1，平衡蛋白电荷。由于电泳时电压相同，会造成蛋白会根据自身电荷水平出现电泳速度差异，而不是分子量。这样就无法通过分子量区分不同的蛋白条带，所以缓冲液第一个成分就是SDS，平衡电荷。

2，减少上样误差。误差主要存在于上样的时候从孔中溢出， 改变的方法就是用甘油把样品的密度加大，让样品沉降到孔的底部，​所以第二个成分是甘油。

3，保持蛋白变性​。电泳依赖于蛋白变性，完整的蛋白是一坨三级结构，要变成线性才能通过凝胶的微孔，变性通过煮沸就可以，但是冷却后蛋白会自发恢复三级结构，所以需要加还原剂保护巯基​。这个部分的成分就是DTT或者​β-巯基乙醇。

4，标记颜色​。上样的时候需要知道自己的样品是不是进入了孔中，跑电泳一半也需要大概看一下溴酚蓝的条带，不过这不是必选项，不加也可以​。

那么好了，直接配制​

首先要知道，上样缓冲液有AB两个组分，需要使用的时候混合，就是还原剂需要现用现配，所以长期保存的A液就是SDS/甘油/溴酚蓝​。B液就是β-巯基乙醇。

5X SDS-PAGE load_buffer 配方（15ml+5ml）

A液：
甘油                         5 ml

SDS                          1g

溴酚蓝（2%）       2.5 ml

Tris-HCL（1M，pH=6.8） 定容至10ml

B液：
β-巯基乙醇 5ml

用前加入3：1=A液：B液